人工授精是養(yǎng)羊業(yè)中的重要實(shí)用生產(chǎn)技術(shù)，但是受胎率不高，限制了其在小型羊場(chǎng)及農(nóng)村的應(yīng)用。目前關(guān)于提高輸精效果的研究有很多[1-4]，影響羊人工授精效果的因素主要有衛(wèi)生狀況、精液處理、輸精技術(shù)等，本試驗(yàn)通過(guò)幾組對(duì)比為實(shí)際生產(chǎn)篩選出一套有效的輸精技術(shù)，以推動(dòng)肉羊生產(chǎn)及品種改良進(jìn)程。

1. 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 所有試驗(yàn)動(dòng)物均是來(lái)自本單位下屬青島奧特種羊場(chǎng)的良種羊，包括無(wú)角道賽特、德克塞爾和小尾寒羊，母羊1.5周歲以上，公羊1.5～2周歲，標(biāo)準(zhǔn)飼管。

1.1.2 儀器與試劑

1.1.2.1儀器設(shè)備

顯微鏡；恒溫水浴鍋；羊用金屬輸精器（配注射器用）；玻璃輸精器；羊用細(xì)管輸精槍；羊用開膣器；手電筒；試管；解凍杯

1.1.2.2試劑藥品

葡萄糖；蔗糖；乳糖；檸檬酸；檸檬酸鈉；青霉素；鏈霉素；95％酒精；生理鹽水；新潔爾滅；高錳酸鉀；VB12

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 待配母羊的準(zhǔn)備 配種前兩個(gè)月根據(jù)母羊年齡、膘情、健康狀況、配種史進(jìn)行選擇，要求2～5歲、膘情適中、健康（尤其沒(méi)有生殖疾病）、無(wú)不良配種記錄。選擇后按試驗(yàn)要求隨即分組，除正常標(biāo)準(zhǔn)飼管外每天加喂胡蘿卜1斤/只，強(qiáng)制運(yùn)動(dòng)2h。

1.2.2 公羊及精液的準(zhǔn)備 配種前2個(gè)月選擇2～5歲、身體健康、膘情適中、性欲旺盛的公羊加強(qiáng)飼管及運(yùn)動(dòng)，增加日糧中蛋白及維生素的水平，每天強(qiáng)制運(yùn)動(dòng)2h。配種前一個(gè)月開始采精并檢查精液質(zhì)量，堅(jiān)持每周采精2～3次。配種前更具采精記錄選擇精子密度高、活力高、射精量大、精液質(zhì)量穩(wěn)定、性欲強(qiáng)的公羊留作配種用。凍精輸精時(shí)按常規(guī)方法解凍并檢查精子活力，0.3以下的不用。

1.2.3 抗生素的添加對(duì)鮮精輸精效果的影響

a.待配母羊的準(zhǔn)備 試驗(yàn)羊挑選后分成2組，按1.2.1飼管。

b.發(fā)情母羊的識(shí)別 選擇健康、性欲旺盛的青年公羊每天早上采用小群試情，結(jié)合對(duì)外陰及行為的觀察做好記錄。

c.輸精 發(fā)情后立即輸精，間隔8～10h再輸精1次，次日試情仍發(fā)情的繼續(xù)輸精。Ⅰ組采用子宮頸內(nèi)無(wú)抗生素鮮精輸精，Ⅱ組采用子宮頸內(nèi)添加抗生素鮮精輸精，輸入有效精子在5000～10000左右，整個(gè)輸精過(guò)程在前低后高的配種架上進(jìn)行，輸精結(jié)束后停留10～15min再驅(qū)趕母羊。輸精器械輸精前要嚴(yán)格消毒，輸精后要立即清洗，鮮精中含青鏈霉素各1000IU/ml。

d.妊娠判斷 配種后母羊堅(jiān)持每天試情，輸精后連續(xù)兩個(gè)發(fā)情周期不發(fā)情視為妊娠，統(tǒng)計(jì)受胎率。

1.2.4 輸精位置及PGF2α對(duì)鮮精與凍精輸精效果的影響

a.待配母羊的準(zhǔn)備 選擇后隨即分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ六個(gè)組，按1.2.1飼管。

b.發(fā)情母羊的識(shí)別 選擇健康、性欲旺盛的青年公羊每天早上采用小群試情，結(jié)合對(duì)外陰的觀察做好記錄。

c.輸精 本試驗(yàn)采用同只公羊多次輸精，發(fā)情后立即輸精，間隔8～10h再輸精1次，次日試情仍發(fā)情的繼續(xù)輸精。Ⅰ～Ⅳ組分別采用子宮頸鮮精、子宮頸凍精、子宮內(nèi)鮮精、子宮內(nèi)凍精輸精，輸入有效精子在5000～10000左右，精液中不添加PG; Ⅴ、Ⅵ組分別采用子宮頸鮮精、子宮頸凍精輸精，精液中添加2％（v/v）的PGF2α注射液。整個(gè)輸精過(guò)程在前低后高的配種架上進(jìn)行，輸精結(jié)束后停留10～15min再驅(qū)趕母羊。輸精器械輸精前要嚴(yán)格消毒，輸精后要立即清洗，凍精與鮮精中都加有1000IU/ml的雙抗。子宮內(nèi)輸精時(shí)左手用宮頸鉗固定子宮頸，右手持輸精槍試探著插入，進(jìn)入盲囊后稍后退，然后嘗試著從其他地方前進(jìn)，直到感覺阻力突然消失時(shí)即進(jìn)入子宮體，稍前行后輸精。

d.妊娠判斷 配種后母羊堅(jiān)持每天試情，輸精后連續(xù)兩個(gè)發(fā)情周期不發(fā)情視為妊娠，統(tǒng)計(jì)受胎率。

2. 試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)中對(duì)添加抗生素對(duì)鮮精輸精效果的影響進(jìn)行了研究（見表1），用無(wú)抗生素的鮮精給106只母羊輸精，73只受胎，受胎率為68.9％；用添加1000IU/ml雙抗的鮮精輸精215只，185只受胎，受胎率86％。

表1 稀釋液中添加抗生素對(duì)鮮精輸精受胎率的影響

輸精母羊數(shù) 受胎母羊數(shù) 受胎率

Ⅰ組（無(wú)抗生素） 106 73 68.9%

Ⅱ組（1000IU/ml雙抗） 215 185 86%

試驗(yàn)中比較了6個(gè)試驗(yàn)組的輸精結(jié)果，輸精母羊數(shù)、受胎母羊數(shù)及受胎率分別為：Ⅰ組203、175、86.2％，Ⅱ組96、41、42.7％，Ⅲ組87、83、95.4％，Ⅳ組109、62、56.9％，Ⅴ組102、89、87.3％，Ⅵ組117、57、48.7％，見表2。

表2 輸精位置及PG添加對(duì)受胎率的影響

輸精母羊數(shù) 受胎母羊數(shù) 受胎率

Ⅰ組（宮頸鮮精無(wú)PG） 203 175 86.2%

Ⅱ組（宮頸凍精無(wú)PG） 96 41 42.7%

Ⅲ組（宮內(nèi)鮮精無(wú)PG） 87 83 95.4%

Ⅳ組（宮內(nèi)凍精無(wú)PG） 109 62 56.9%

Ⅴ組（宮頸鮮精含PG） 102 89 87.3%

Ⅵ組（宮頸凍精含PG） 117 57 48.7%

3. 討論

目前生產(chǎn)中使用較多的仍然是鮮精輸精，但是由于現(xiàn)場(chǎng)條件及技術(shù)人員水平的制約，對(duì)衛(wèi)生不太注意，精液中細(xì)菌含量很高，精液稀釋時(shí)多采用現(xiàn)成的稀釋液如：生理鹽水、維生素B12等（不含抗生素），輸精器械消毒處理也不嚴(yán)格，整個(gè)操作過(guò)程中會(huì)造成了精液的污染，降低受胎率的同時(shí)也造成了生殖道疾病的傳播。試驗(yàn)表明精液內(nèi)細(xì)菌數(shù)與精子存活時(shí)間及活力保持有著明顯的負(fù)相關(guān)，因此在精液中添加一定量的抗生素非常必要，這不僅是提高受胎率的一項(xiàng)重要措施，也是減少疾病傳播的基本要求。本試驗(yàn)中使用含雙抗1000IU/ml的精液輸精，與對(duì)照組有顯著差異，分析試驗(yàn)結(jié)果認(rèn)為，添加抗生素一方面延長(zhǎng)了精子在保存液中的存活時(shí)間，另一方面輸精后對(duì)雌性生殖道內(nèi)的細(xì)菌也有一定的殺滅作用，這與生產(chǎn)中對(duì)患輕度子宮內(nèi)膜炎的母牛先注入大量抗生素再輸精以提高受胎率的做法有相似的道理。羊的輕度子宮炎癥不容易被發(fā)現(xiàn)，加入抗生素輸精就顯得更為重要。

卵子從到達(dá)受精部位（具有受精能力）到喪失受精能力的時(shí)間為2小時(shí)，輸精過(guò)早，精子在卵子沒(méi)有到達(dá)受精部位之前已經(jīng)死亡或不具備受精的能力；輸精過(guò)遲，等精子到達(dá)受精部位時(shí)卵子已經(jīng)死亡或不具備受精的能力,但是排卵時(shí)間很難進(jìn)行準(zhǔn)確判斷，生產(chǎn)中采用多次輸精來(lái)提高受胎率。但是對(duì)于凍精來(lái)說(shuō)，由于冷凍過(guò)程對(duì)精子造成了一定的損傷，使其在雌性生殖道內(nèi)的存活時(shí)間縮短，使其在恰當(dāng)?shù)臅r(shí)間到達(dá)受精位置非常重要，國(guó)內(nèi)外的有些試驗(yàn)已經(jīng)證明在直接子宮內(nèi)輸精能顯著提高凍精受胎率，但是在生產(chǎn)中推廣宮內(nèi)輸精是很困難的，只有部分經(jīng)產(chǎn)母羊可以進(jìn)行宮內(nèi)輸精，生產(chǎn)中只有通過(guò)其他方法來(lái)解決這一難題，目前添加激素的研究較多，本試驗(yàn)中通過(guò)幾個(gè)試驗(yàn)組的比較發(fā)現(xiàn)PG確實(shí)能提高受胎率，但是對(duì)鮮精輸精效果影響不大。Kelly 1985年報(bào)道認(rèn)為PGE能顯著提高精子運(yùn)動(dòng)速度，精子頭部的轉(zhuǎn)動(dòng)速率和精子的穿透能力[5]，還有研究認(rèn)為在解凍液里添加PG能提高精子解凍活力和頂體完整率。此外PGF2α還能促進(jìn)子宮平滑肌的收縮，有利于精子的在生殖道內(nèi)的運(yùn)行；PGF2α有促排卵作用及促輸卵管收縮作用，對(duì)排卵、卵子運(yùn)行、受精及胚胎著床有積極的正面意義。PGF2α是生產(chǎn)中常用的藥物，但是在羊的人工授精中使用不多，本試驗(yàn)表明無(wú)論是鮮精還是凍精添加PGF2α都能提高凍精受胎率，尤其是在凍精使用過(guò)程中值得推廣，但是最佳的添加劑量值得進(jìn)一步研究。本試驗(yàn)參照別人的方法對(duì)經(jīng)產(chǎn)母羊進(jìn)行過(guò)子宮頸輸精發(fā)現(xiàn)部分經(jīng)產(chǎn)母羊發(fā)情時(shí)可以過(guò)子宮頸或子宮頸內(nèi)深部輸精，而且結(jié)果顯示子凍精宮內(nèi)輸精受胎率顯著高于子宮頸輸精，對(duì)于經(jīng)產(chǎn)羊凍精輸精可以采用這一技術(shù)以提高受胎率。

本試驗(yàn)中添加抗生素和PG輸精取得了較好的輸精效果，可以在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用；使用凍精輸精時(shí)添加PG可以提高受胎率，經(jīng)產(chǎn)母羊可以嘗試過(guò)子宮頸輸精或子宮頸深部輸精以提高受胎率。

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